Xây dựng quy trình xét nghiệm chẩn đoán Coxsackievirus A16 bằng kỹ thuật PCR từ bệnh phẩm nghi tay chân miệng

Xây dựng quy trình xét nghiệm chẩn đoán Coxsackievirus A16 bằng kỹ thuật PCR từ bệnh phẩm nghi tay chân miệng.
Tác giả: Lê Thị Kim Trang, Trịnh Thị Xuân Mai, Huỳnh Kim Mai, Lâm Tú Quỳnh, Diệp Thùy Dung, Trịnh Hoàng Long, Hoàng Thị Ngọc Anh.
Tóm tắt:
Coxsackie virus A16 (CA16) và enterovirus 71 (EV71) là hai tác nhân chính gây bệnh Tay chân miệng (TCM) ở trẻ em với các triệu chứng lâm sàng khó phân biệt, thường lưu hành đồng thời trong các vụ dịch. Quy trình xét nghiệm chẩn đoán Coxsackie virus A16 bằng kỹ thuật PCR được xây dựng để phát hiện CA16 từ bệnh phẩm của các trường hợp theo dõi bệnh TCM, của các tỉnh miền Trung gửi về Viện Pasteur Nha Trang. Kỹ thuật PCR được thực hiện với cặp mồi tự thiết kế để phát hiện vùng gen VP1 của CA16, và tối ưu hóa phản ứng PCR với bộ sinh phẩm Go Taq polymerase (Promega). Sử dụng các chủng CA16, EV71 và các mẫu đã xác định trước kết quả để kiểm tra độ đặc hiệu và độ nhạy của phản ứng, sau đó quy trình được áp dụng trên mẫu bệnh phẩm. Kết quả cho thấy, phản ứng PCR với cặp mồi thiết kế CA16F1/ CA16R2 tối ưu với thành phần hỗn hợp phản ứng: NFW:12,8 μl; buffer 5X: 5 μl; MgCl2: 2,5 μl; dNTPs: 1 μl; Primer : 0,5 μl; GoTaq Flexi DNA Polymerase: 0,2 μl; cDNA khuôn: 2,5 μl; Chu kỳ nhiệt: 940C/3 phút; (940C/30 giây, 650C/45 giây, 720C/1 phút) x 35 chu kỳ; 720C/5 phút; và giữ ở 40C; phản ứng có độ đặc hiệu và độ nhạy đạt 100%. So với kỹ thuật phân lập, kỹ thuật này có độ nhạy cao hơn và cho kết quả sớm hơn, đáp ứng kịp thời việc xác minh và chẩn đoán phân biệt giữa hai tác nhân EV71 và CA16, hỗ trợ công tác theo dõi điều trị và phòng chống dịch bệnh TCM